如何驗證自動細胞計數儀：使用驗證載玻片的益處

關鍵詞：自動細胞計數儀、細胞計數準確性、細胞計數儀驗證載玻片、ISO 20391 標準、細胞計數參考材料、細胞計數技術、LUNA 細胞計數儀系列、細胞計數驗證、細胞活力評估

1 引言

自動細胞計數儀因其能夠快速、精確地提供細胞計數結果而廣受歡迎。盡管有這些優(yōu)點，但驗證其準確性以確保可靠的細胞計數結果至關重要。微球常被用于驗證流式細胞儀和自動細胞計數儀等設備。但使用微球存在各種問題，促使了細胞計數儀驗證載玻片的研發(fā)，用于驗證點成LUNA™細胞計數儀系列。

在本文中，我們將探討細胞計數標準，以及使用細胞計數儀驗證載玻片來驗證點成LUNA™細胞計數儀系列的優(yōu)勢。

2 國際細胞計數標準

ISO 20391 標準的制定是為了為準確的細胞計數提供指導，并確保細胞計數結果的可靠性。該標準概述了一種通過系列稀釋實驗來驗證細胞計數測量質量的方案，當沒有參考材料時可以使用該方案。然而這個過程可能既耗時又復雜，需要進行復雜的計算來確定決定系數和比例系數。

為了克服這一挑戰(zhàn)，建議使用參考材料以確保測量的可追溯性、便于進行比較并驗證測量過程。有效的方法是將平均分析結果與從有證參考材料中獲得的參考值進行比較，從而無需進行復雜的計算。盡管如此，選擇合適的參考材料仍然面臨挑戰(zhàn)。

3 使用驗證微球作為參考材料的挑戰(zhàn)

驗證微球，如美國國家標準與技術研究院（NIST）微球，常被用作涉及粒徑和計數的各種分析方法中的參考材料。這些微球具有已知的大小和濃度，常被用作流式細胞術、顯微鏡檢查和其他類似技術的校準標準。但是NIST 微球沒有熒光形式，不適合測試細胞活力。

雖然商用熒光微球可以作為替代，但移液過程中的誤差以及長期儲存期間的蒸發(fā)可能會影響其準確性，這需要小心處理和反復測試。因此目前沒有可用于細胞活力評估的商用參考材料。

選擇自行在內部制備參考材料的用戶將不得不依賴手動計數，手動計數相對不精確，并且需要大量的樣本。或者可以使用流式細胞術，盡管獲得計數結果可能具有挑戰(zhàn)性，這種方法不太方便用戶操作。因此需要找到一種替代的細胞活力評估方法。

4 使用驗證載玻片作為參考材料

使用具有穩(wěn)定性和一致性的參考材料對于確保細胞計數的準確結果至關重要。一種能夠提供這種質量控制水平的選擇是使用驗證載玻片。這些載玻片包含預先點樣的圖案或預先固定的熒光微球，上面有已知數量的物體，消除了諸如因樣本加載導致的濃度變化、儲存期間的蒸發(fā)或分布不均等問題。

此外，驗證載玻片允許使用細胞計數儀的明場和熒光光學系統來驗證總細胞計數和細胞活力。與其他設備進行交叉驗證也很簡單，并且其穩(wěn)定性確保即使長期儲存或反復使用，測量值也能保持一致。通過使用驗證載玻片，研究人員可以節(jié)省原本用于進行額外實驗以確保準確性的時間和資源。

（A）       細胞計數儀驗證載玻片 —— 明場 II 型 （B）細胞計數儀驗證載玻片 —— 熒光型

5 如何使用細胞計數儀驗證載玻片評估準確性

細胞計數儀驗證載玻片方案通過提供一種簡單而高效的替代微球的方法，簡化并改進了驗證細胞計數儀準確性的過程。這種方法節(jié)省了時間，并提供了一種簡便的方法來驗證細胞計數結果的準確性。

要使用細胞計數儀驗證載玻片方案，請按照以下簡單步驟操作：

1)       檢查細胞計數儀驗證載玻片標簽上的細胞濃度和細胞活力值。

2)       將載玻片插入細胞計數設備中。

3)       使用 “IQOQ" 方案開始計數。

4)       記錄總細胞濃度和細胞活力值。

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